文献类型： 中文期刊

作者： 徐欢 ¹ ; 段盛文 ¹ ; 冯湘沅 ¹ ; 郑科 ¹ ; 杨琦 ¹ ; 汪启明 ² ; 成莉凤 ¹ ; 彭源德 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院麻类研究所

2.湖南农业大学生物科学技术学院

关键词： 苎麻;生物脱胶;果胶裂解酶;原核表达;生物信息学

期刊名称： 华北农学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 005 期

页码： 18-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为使苎麻生物脱胶果胶裂解酶PelG403高效表达。将pelG403从重组质粒pEASY-Blunt E1-G403更换至质粒拷贝数更高的pET28a载体中,导入Escherichia coli BL21（DE3）后进行诱导表达。采用DNS法进行酶活力测定,通过SDS-PAGE和Western Blot分析检验PelG403表达效果,并对其序列进行分析鉴定。结果表明:pET28a-G403/BL21的果胶裂解酶活力为335.8 U/mL,较pEASY-Blunt E1-G403/BL21提高了3.05倍;工程菌pET28a-G403/BL21表达产物分子量比预测带His标签的融合蛋白分子量（43.6 ku）略小;PelG403含387个氨基酸,N末端前35个氨基酸为信号肽;理论pI值为7.64,有4个半胱氨酸,不稳定系数为27.42;其蛋白结构域含有典型的右手β-螺旋结构,属于Pec lyase C家族。因此,将pelG403从重组质粒pEASY-Blunt E1-G403更换至pET28a载体中,并导入E.coli BL21（DE3）进行诱导表达,是苎麻脱胶果胶裂解酶基因pelG403高效表达的方法和途径,同时对其序列进行分析鉴定,为果胶裂解酶的纯化、关键位点分析、分子改造及其脱胶功能特性研究奠定基础。