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一种新型果胶裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及序列分析

文献类型： 中文期刊

作者： 徐欢 1 ; 冯湘沅 1 ; 郑科 1 ; 杨琦 1 ; 段盛文 1 ; 成莉凤 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院麻类研究所

关键词： 苎麻;果胶裂解酶;生物脱胶;原核表达;生物信息学

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 196-201

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了获得高酶活力的苎麻脱胶果胶裂解酶，为后续分子改造和新型苎麻生物脱胶酶制剂复配提供理论依据。将果胶裂解酶基因pel419从重组质粒pEASY-Blunt E1-pel419更换至pET28a载体中，转化大肠杆菌BL21（DE3）诱导表达；用SDS-PAGE和Western Blot检验pel419基因的表达效果；用生物信息学软件分析Pel419理化表征和系统发育，预测其二级结构、高级结构及关键氨基酸位点。结果表明，工程菌pET28a-pel419/BL21的果胶裂解酶活力为434.4 U/mL,较pEASY-Blunt E1-pel419/BL21提高了1.7倍；Pel419含375个氨基酸，N末端前22个氨基酸为信号肽，理论pI值为6.59,有4个半胱氨酸，不稳定系数为18.20;其蛋白结构域含有典型的右手β-螺旋结构，属于Pec lyase C家族；Pel419的Ca2+结合位点为ASP151、ASP153和ASP192,定位发现3个保守位点均暴露在三维空间的表面，并处于底物结合空间口袋。大幅度提高了Pel419表达量，并获得了Pel419关键结构信息。

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