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抗黄矮病小麦-中间偃麦草易位系基因组可转化人工染色体文库的构建及初步筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 王晓萍 1 ; 张增艳 1 ; 张群宇 2 ; 刘耀光 2 ; 辛志勇 3 ;

作者机构： 1.中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点实验室

2.华南农业大学生物技术学院遗传工程研究室

3.中国农业科学院作物育种栽培研究所农业部作物遗传育种重点?

关键词： 小麦;黄矮病抗性;可转化人工染色体(TAC);文库;SCAR

期刊名称： 遗传学报

ISSN： 0379-4172

年卷期： 2002 年 29 卷 08 期

页码： 712-718

收录情况： SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用抗黄矮病小麦 -中间偃麦草易位系HW6 4 2的细胞核DNA构建了一个可转化人工染色体 (transformation competentartificialchromosome,TAC)文库 ,文库由 2 .3× 10 6 克隆构成 ,重组率为 90 .4 8% ,平均插入片段大小为 2 2kb左右 ,约覆盖普通小麦单倍体基因组 2 .5倍 ,在该文库中分离得到单拷贝DNA序列的几率约是 95 .77%。文库保存在 2 4块 96孔板中 ,每个孔中约含有 10 0 0个不同的重组克隆 ,可以采用PooledPCR的方法对文库进行筛选。用来源于小麦的简单重复序列 (simplesequencerepeat,SSR)引物wms37扩增中间偃麦草、抗病易位系及感病材料 ,得到一条与抗性共分离的特异条带 ,约 4 5 0bp。将此特异标记条带转化为SCAR(sequencecharacterizedamplifiedregion)标记 ,用于筛选HW6 4 2基因组TAC文库 ,得到 12个阳性克隆。对阳性克隆进行了PCR Southern验证 ,以中间偃麦草基因组总DNA为探针与限制酶HindⅢ消化后的阳性克隆杂交 ,其中 10个阳性克隆分别有 1～ 6条杂交带 ,结果表明 ,这 10个阳性克隆可作为抗黄矮病相关基因筛选的候选克隆

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