文献类型： 中文期刊

作者： 汪芋 ¹ ; 张守峰 ² ; 于婷婷 ¹ ; 米立娟 ² ; 么乃全 ¹ ; 缪发明 ² ; 扈荣良 ¹ ;

作者机构： 1.吉林农业大学动物医学院

2.中国农业科学院长春兽医研究所

关键词： 狂犬病;狂犬病病毒糖蛋白;慢病毒;细胞系;免疫试验;亚单位疫苗

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2024 年 44 卷 011 期

页码： 2393-2399

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为得到可用于狂犬病亚单位疫苗生产的高效表达狂犬病病毒(rabies virus, RABV)糖蛋白的细胞系，本研究以RT-PCR扩增获得RABV糖蛋白基因序列并克隆入慢病毒表达载体中。重组质粒pLV-RVG与包膜质粒pMD2.0G及包装质粒psPAX2共转染HEK-293T细胞，收获慢病毒并感染新的HEK-293T细胞，通过嘌呤霉素加压筛选获得293T-RVG细胞系。将此细胞系传代20代，间接免疫荧光法(IFA)及Western blot鉴定表明67 kDa的RABV-G蛋白在该细胞内能够高效表达；且细胞系冻融物293T-RVG辅以佐剂肌肉注射免疫小鼠，血清以FAVN法测定RABV中和抗体，在免疫14 d体内效价就可达到2.19 IU/mL,高于国际公认保护阈值(0.5 IU/mL)。本研究成功构建了稳定且高效表达RABV糖蛋白的细胞系293T-RVG,该细胞系能够对攻毒小鼠产生保护作用，可作为一种亚单位疫苗，具备用于大规模生产和应用潜能。