文献类型： 中文期刊

作者： 刘庆友 ¹ ; 伏彭辉 ² ; 刘金凤 ³ ; 邓彦飞 ⁴ ; 蒋如明 ⁵ ;

作者机构： 1.广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室

2.西南大学荣昌校区

3.广西大学亚热带生物资源保护利用国家重点实验室中国农业科学院广西水牛研究所广西医科大学医学科学实验中心广西兽医研究所

4.广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室

5.广西大学

关键词： 水牛;cMyc基因;TAT;融合表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2011 年 01 期

页码： 65-69

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探讨干细胞转录因子与穿膜肽融合表达蛋白对水牛体细胞诱导重编程的可行性,作者对影响水牛cMyc基因穿膜肽融合蛋白表达的因素进行了探索。应用双酶切定向克隆的方法,将水牛cMyc基因CDS(1 350bp)连接到pET-HA2-TAT载体中,构建成pET-cMyc-TAT载体,经酶切、PCR和测序验证,载体构建正确。将pET-cMyc-TAT载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导目的蛋白表达,同时探索了其表达形式、诱导表达IPTG最优浓度和最优时间以及蛋白纯化咪唑洗脱的最佳浓度。结果表明,融合蛋白cMyc-TAT在37℃以包涵体的形式大量表达,IPTG终浓度0.001mmol/L,诱导5h为最佳诱导条件,纯化蛋白最佳咪唑洗脱浓度为145.76mmol/L,纯化蛋白经过Western-blot验证具有抗原性。研究结果为建立转录因子穿膜肽融合蛋白诱导水牛iPS细胞技术体系奠定了基础。