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p53基因表达沉默的稳定Vero细胞系的建立及特性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 刘超 1 ; 邱亚峰 1 ; 沈阳 1 ; 刘庆伟 1 ; 马志永 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室

关键词： p53;慢病毒载体;RNA干扰;筛选;细胞系

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2010 年 0 卷 07 期

页码： 83-88

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立稳定沉默p53基因的Vero细胞模型。设计针对p53基因的shRNA序列,构建p53shRNA慢病毒载体并感染Vero细胞;嘌呤霉素筛选阳性细胞,局部消化法挑选细胞克隆;利用RT-PCR和West-ernblot检测p53的表达水平;利用虫荧光素酶报告系统,分析p53的转录激活功能。RT-PCR和Westernblot结果显示,慢病毒介导的shRNA有效地沉默p53基因表达;与对照组细胞相比,干扰组细胞的p53的转录激活功能明显降低。慢病毒介导的shRNA高效、稳定地沉默了p53基因的表达,同时,有效地降低了p53的转录激活功能,为研究p53的生物学功能提供了有利的工具。

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