文献类型： 中文期刊
作者：
马泽林
1
;
张永莉
1
;
刘强
1
;
胡守萍
1
;
张卓
1
;
何希君
1
;
作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
关键词： RNAscope~?原位杂交;免疫组织化学;细胞凋亡;猪繁殖与呼吸综合征病毒
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2019 年 01 期
页码： 40-45
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为扩大RNAscope~?原位杂交技术(RNAscope~?ISH)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基础研究中的应用范围,本研究将该技术与免疫组织化学技术(IHC)相结合,通过条件优化建立了RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术。经检测不同病毒感染的组织切片中的PRRSV表明该技术具有良好的特异性。采用该双重染色技术检测PRRSV感染的猪淋巴结组织切片中巨噬细胞感染PRRSV情况,结果显示PRRSV核酸主要存在于巨噬细胞胞浆中,在胞核中也有分布,但在一些非巨噬细胞中也散在PRRSV阳性信号,表明PRRSV不仅在猪淋巴结巨噬细胞中复制。利用该双重染色技术检测PRRSV感染后不同时间点猪胸腺组织切片中凋亡相关调节基因Bid、Bcl-xl表达水平,结果显示一段时间内Bid基因转录水平上调、Bcl-xl基因转录水平下调,与同条件下荧光定量PCR结果一致。综上,本研究建立的RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术结合了RNAscope~?ISH与IHC各自的优势,不仅能够检测病毒感染后在组织中的定位,还可以分析病毒感染后宿主内源性基因转录的变化趋势,实现了在同一组织切片中对核酸与蛋白的双重检测。经验证该检测方法适用于PRRSV实验室研究,为PRRSV的相关基础研究提供新的检测手段。
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