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CHO细胞表达牛病毒性腹泻病毒E2-Erns融合蛋白及免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 李亚军 1 ; 郝荣增 1 ; 茹毅 1 ; 龚真莉 1 ; 刘艳红 1 ; 郑海学 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 牛病毒行腹泻病毒;E2-Erns融合蛋白;真核表达;CHO培养;免疫原性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2023 年 010 期

页码： 1207-1215

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）E2-Erns融合蛋白，并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础，构建融合表达BVDV E2和Erns蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-Erns，转染CHO细胞，进行上清分泌表达；离心收集细胞培养上清进行亲和层析纯化，通过SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白的免疫反应性；使用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔，通过细胞免疫荧光（IFA）试验和间接ELISA试验鉴定E2-Erns融合蛋白免疫家兔血清的抗体反应性和抗体效价。结果，通过CHO细胞表达系统，成功制备了纯化的BVDV E2-Erns融合蛋白，Western-blot鉴定结果显示，His标签单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的融合蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA试验结果显示，一免后第7天血清抗体呈阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平可达1∶512 000，且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV发生特异性免疫反应。上述结果表明，本研究成功利用CHO细胞表达系统制备并纯化了BVDV E2-Erns融合蛋白，并通过体内和体外试验证明该融合蛋白具有良好的免疫原性，为BVD的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。

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