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苹果坏死花叶病毒CP基因原核表达及其抗血清制备

文献类型： 中文期刊

作者： 邢飞 1 ; 王红清 1 ; 李世访 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室;中国农业大学园艺学院

关键词： 苹果坏死花叶病毒;外壳蛋白基因;原核表达;抗血清;酶联免疫吸附分析方法

期刊名称： 西南大学学报(自然科学版)

ISSN： 1673-9868

年卷期： 2024 年 46 卷 004 期

页码： 63-69

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规检测方法尤为必要.通过设计特异性引物,以RT-PCR方法成功获得ApNMV CP基因序列,插入到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG进行重组蛋白(含His-tag)诱导表达.SDS-PAGE和 Western blot分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,用Ni Sepharose 6 Fast Flow进行蛋白纯化,回收共得到重组蛋白2.4 mg.在屏障环境下免疫2只SPF级新西兰兔,制备出多克隆抗血清,稀释400倍后仍能与ApNMV阳性苹果叶片样品发生免疫反应.由此证明,本研究建立的ApNMV间接ELISA检测方法具有较好的灵敏性,检测效率高,能够用于田间大量样品ApNMV的诊断.

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