文献类型： 中文期刊
作者： 郭林 1 ; 王晓杜 1 ; 刘庆伟 1 ; 沈阳 1 ; 邱亚峰 1 ; 李向东 1 ; 罗满林 2 ; 马志永 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室
2.华南农业大学兽医学院
关键词： 猪流感病毒;NS2;克隆;表达;特性分析
期刊名称： 畜牧与兽医
ISSN： 0529-5130
年卷期： 2014 年 46 卷 09 期
页码： 5-10
收录情况： 北大核心
摘要： 采用RT-PCR方法克隆猪流感病毒H3N2亚型NS2全长基因,构建NS2基因原核表达质粒pET-28a-NS2和真核表达质粒p3xFLAG-CMVNS2,在大肠杆菌和真核细胞内表达NS2基因,并制备抗NS2多克隆抗体。用所制备的抗体分析p3xFLAG-CMV-NS2转染表达NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。结果表明:经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导后,重组蛋白NS2在大肠杆菌中得到表达。表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备抗NS2蛋白多克隆抗体,Western-blot分析表明抗NS2多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的NS2蛋白、转染Vero细胞表达的NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白。间接免疫荧光发现NS2蛋白主要定位于细胞质。本试验为进一步研究NS2蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础。
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