文献类型: 中文期刊
作者: 孙雪珂 1 ; 丁培阳 2 ; 王思桥 1 ; 刘思源 3 ; 李明慧 3 ; 常泽杰 3 ; 陈艺兰 3 ; 李瑞琪 3 ; 张改平 1 ;
作者机构: 1.河南农业大学生命科学学院
2.郑州大学生命科学学院
3.河南省农业科学院
关键词: 猪δ冠状病毒;S1蛋白;CHO细胞;稳定表达;蛋白质纯化
期刊名称: 河南农业科学
ISSN:
年卷期: 2023 年 006 期
页码: 131-138
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 为构建稳定表达猪δ冠状病毒(PDCoV)S1蛋白的CHO细胞系,利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S1转染至CHO细胞,通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化,采用间接ELISA方法检测重组S1蛋白活性。将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。结果显示,稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系成功建立,并获得了纯度高于90%、产量为28.5 mg/L的重组S1蛋白;且重组S1蛋白与PDCoV阳性血清反应性良好,具有良好的免疫原性,中和效价为1∶128。综上,成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO细胞系,且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。
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