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PK-15细胞的THBS3基因缺失抑制PRV复制

文献类型： 中文期刊

作者： 李志杰 1 ; 刘培欣 1 ; 杨涛 1 ; 张瑜 1 ; 宋海慧 1 ; 张闯 1 ; 王岳 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

关键词： THBS3;PK-15细胞;CRISPR/Cas9;PRV

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2023 年 43 卷 011 期

页码： 2293-2297

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探索猪血小板反应蛋白3(thrombospondin 3,THBS3)在PRV复制中的功能,利用CRISPR/Cas9系统构建THBS3基因缺失的PK-15稳定细胞株.首先,根据THBS3基因序列和CRISPR/Cas9靶点设计原则设计并合成2对sgRNA序列,退火后连接到Lenti-CRISPRv2慢病毒表达载体;与慢病毒包装质粒共转染人胚肾细胞(HEK293T)获得重组慢病毒,收集细胞上清并离心去细胞碎片后转导PK-15细胞,进行嘌呤霉素筛选获得THBS3敲除的PK-15 细胞株;将重组病毒rPRV-GFP接种至野生型和缺失型细胞评价病毒复制差异.结果显示,表达sgRNA的重组质粒构建成功;将收获的慢病毒转导细胞后通过筛选获得1株无THBS3蛋白表达细胞株(PK-THBS3-KO),通过测序发现外显子3有1个碱基的插入;感染试验显示,THBS3基因缺失后抑制了 PRV复制.结果表明,通过CRISPR/Cas9系统成功构建了 PK-15的THBS3基因敲除的稳定细胞株,PRV感染试验显示基因缺失后抑制了病毒复制.

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