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pAPN基因敲除的IPEC-J2介导的TGEV感染特征分析

文献类型： 中文期刊

作者： 夏振涛 1 ; 王楠 1 ; 王婉洁 1 ; 周期律 1 ; 黄雷 2 ; 牟玉莲 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

2.中国农业科学院农业基因组研究所

关键词： 猪氨基肽酶N;IPEC-J2;TGEV;NF-κB

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 3395-3407

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在探究猪氨基肽酶N（porcine aminopeptidase N,pAPN）基因敲除的猪空肠上皮细胞系（intestinal porcine epithelial cell line J2,IPEC-J2）介导猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus, TGEV）感染的特征，为深入了解pAPN基因在TGEV感染过程中的作用机制提供理论依据。研究分为pAPN基因敲除IPEC-J2组（IPEC-J2-KO组）、野生型IPEC-J2组（IPEC-J2-WT组）和未接种TGEV的野生型IPEC-J2组（Mock组）3组，每组设置3个重复。首先通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）确定IPEC-J2接种TGEV毒株后收取细胞样品的最佳时间节点；其次，对IPEC-J2-KO进行了脱靶效应检测；然后，通过qPCR、蛋白免疫印迹（western blot, WB）、间接免疫荧光分析（indirect immunofluorescence assay, IFA）和50%组织细胞感染量(50%tissue culture infective dose, TCID50)对接种TGEV的IPEC-J2-KO、IPEC-J2-WT及Mock进行感染特征分析；最后，通过WB检测IPEC-J2-KO、IPEC-J2-WT和Mock中NF-κB p65及其磷酸化蛋白pp65的表达情况。qPCR结果显示，接毒24 h是收集细胞样本以评估TGEV对IPEC-J2影响的最佳时间节点；脱靶分析结果显示，在IPEC-J2-KO中未检测到脱靶效应；病毒感染特征分析结果显示，与IPEC-J2-WT相比，IPEC-J2-KO内病毒拷贝数、病毒滴度均极显著降低（P<0.001）,与Mock相比，IPEC-J2-KO内病毒拷贝数、病毒滴度均无显著差异（P>0.05）,且IPEC-J2-KO内未检测到TGEV-N蛋白的表达；此外，与Mock相比，接种TGEV后，IPEC-J2-WT组NF-κB p65的磷酸化水平极显著上调（P<0.001）,而IPEC-J2-KO组无显著差异（P>0.05）。本研究表明，IPEC-J2-KO可有效抵抗TGEV的感染，接种TGEV未影响IPEC-J2-KO中先天免疫相关信号通路中转录因子NF-κB的活性。该研究为IPEC-J2作为TGEV感染特征研究的细胞模型提供了理论依据，为阐明pAPN基因在TGEV入侵宿主细胞的机制及抗病猪新品种的研究奠定了基础。

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[2]猪流行性腹泻病毒感染猪小肠上皮细胞miRNA表达谱分析及验证. 张宸语,陈佳宁,温建新,刘光亮. 2018

[3]利用CRISPR/Cas9编辑系统构建pAPN基因敲除的IPI-2I细胞系. 徐长江,王晓朋,徐奎,张秀玲,向光明,赵海全,牟玉莲,林晓,李奎. 2021

[4]猪氨基肽酶N不是猪德尔塔冠状病毒入侵宿主细胞的受体. 卢曼曼,张家林,王洪峰,时洪艳,张鑫,袁婧,石达,刘建波,陈建飞,冯力. 2017

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[6]2013-2014年全国23个地区猪腹泻病毒的流行病学调查. 张贺伟,张华,孟庆森,夏铭崎,王鑫,王炜,宋妮,宁晨,赵建增,武华. 2015

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[8]巴弗洛霉素A1体外广谱抗冠状病毒作用研究. 魏秉洁,张翠玲,尚超,李霄,金宁一. 2023

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[12]脂多糖对新生小鼠肺血管内皮细胞的影响及机制探讨. 邓思俊,张晗,郭春宝,刘旭薇,游瑶瑶,邓春. 2019

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[14]小鼠Toll样受体9基因的克隆、表达及其活性的初步鉴定. 彭丽娜,邱亚峰,繆剑华,李向东,王晓杜,袁经权,王寿昆,李力,马志永. 2010

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[17]p53调控Nfkbiz基因表达的研究. 杨逸凡,杜立中,朱紫祥,李满,魏建超,史子学,邵东华,李蓓蓓,马志永. 2014

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[19]NF-κB免疫生物学作用的研究进展. 孙静静,邵军军,常惠芸. 2011

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