文献类型： 中文期刊
作者： 高闪电 1 ; 常惠芸 1 ; 独军政 1 ; 邵军军 1 ; 丛国正 1 ; 林彤 1 ; 韩雪清 2 ; 谢庆阁 1 ;
作者机构： 1.家畜疫病病原生物学国家重点实验室
2.中国检验检疫科学研究院
关键词： SAT2型口蹄疫病毒;结构蛋白VP1;原核表达;反应原性分析
期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志
ISSN： 1007-8738
年卷期： 2010 年 26 卷 007 期
页码： 631-634
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的:表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VP1及其C端,进行反应原性分析并制备多克隆抗体.方法:以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1编码区的重组克隆载体为模板,设计特异性引物,扩增VP1基因及其C端编码区,然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导,以金属离子螯合层析法对表达的VP1、VP1 C端融合蛋白进行纯化,经Western blot对其反应原性进行分析.用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价.结果:实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VP1及其C端的高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在.SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35 000和19 000处有单一目的条带,具有较高的纯度.Western blot结果显示,纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应,而与阴性对照血清无交叉反应.结论:用纯化的VP1及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1:12 800以上,具有较高的特异性.
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