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非洲马瘟病毒VP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 范亚亚 1 ; 王轩莹 1 ; 户鑫兵 1 ; 田占成 1 ; 关贵全 1 ; 罗建勋 1 ; 殷宏 1 ; 郑玉姝 1 ; 独军政 1 ;

作者机构： 1.河南科技学院动物科技学院;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心

关键词： 非洲马瘟病毒;VP5蛋白;杆状病毒表达系统;多克隆抗体;免疫荧光

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 54 卷 003 期

页码： 357-363

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了确定非洲马瘟病毒(AHSV)VP5蛋白的免疫学特性,通过人工合成非洲马瘟病毒VP5蛋白的S6全长基因序列,经PCR扩增后克隆到转座质粒载体pFastBac HTb上,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑试验筛选出重组杆状病毒质粒Bacmid-AHSVS6,转染Sf9昆虫细胞;构建了重组质粒pFastBac-AHSVS6,拯救获得含有AHSV S6基因的重组杆状病毒.SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明,在Sf9昆虫细胞中成功表达分子质量大小为60 ku的AHSV VP5重组蛋白.采用组氨酸标签纯化树脂对重组VP5蛋白进行纯化,将其与弗氏佐剂乳化后3次免疫新西兰大白兔收集血清,获得了针对AHSV VP5蛋白的多克隆抗体,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验验证了该抗体的特异性.本试验利用杆状病毒表达系统成功表达了 AHSV全长VP5重组蛋白,成功制备出特异的VP5蛋白多克隆抗体,这为进一步研究AHSV VP5蛋白的功能及研制亚单位疫苗奠定了基础.

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