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拟除虫菊酯类农药降解酯酶EstA融合蛋白表达质粒的构建和诱导条件优化

文献类型： 中文期刊

作者： 刘娜 1 ; 徐汉卿 2 ; 崔健 1 ; 茆灿泉 1 ; 许雷 2 ;

作者机构： 1.西南交通大学生命科学与工程学院

2.中国农业科学院研究生院

关键词： 拟除虫菊酯类农药;生物降解;酯酶;estA基因;可溶性蛋白;原核表达条件优化

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2014 年 43 卷 02 期

页码： 78-85

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以前期克隆得到的拟除虫菊酯类农药降解基因estA(GenBank:DQ906143)为出发基因,构建表达系统,获得可溶性融合蛋白,并通过优化诱导表达条件,获得具有实际应用价值的相关应用参数。结果表明,成功构建了重组表达载体pMal-c2X-estA并转化至宿主菌BL21(DE3),获得酯酶estA基因诱导表达系统;通过SDS-PAGE凝胶电泳、以α-乙酸萘酯为底物的酶活性检测及Western blot方法,确认外源蛋白EstA在大肠杆菌宿主菌中成功表达并具有酯酶活性。重组基因工程菌可溶性原核表达诱导条件的优化试验表明,其最佳诱导表达条件是:Ca2+浓度1.0mmol/L、诱导初始OD600值0.7、诱导剂IPTG浓度0.1mmol/L、诱导初始pH值7、诱导温度26℃、诱导时间17.5h,优化后的酯酶活性(92.03U/mg)较优化前(44.64U/mg)提高了1倍多。

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