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细粒棘球蚴感染绵羊血清miRNA差异表达及诊断价值评价

文献类型： 中文期刊

作者： 吴易璇 1 ; 郭小腊 2 ; 陈轶霞 1 ;

作者机构： 1.西北民族大学生命科学与工程学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 细粒棘球蚴;微小RNA;血清;高通量测序;ROC曲线

期刊名称： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志

ISSN： 1000-7423

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 295-302

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 筛选细粒棘球蚴感染后绵羊血清中差异表达的miRNA，评价其在棘球蚴病诊断中的潜在价值。方法 10只绵羊分为感染组（5只）和对照组（5只），感染组每只绵羊灌胃2 000个细粒棘球绦虫虫卵，对照组绵羊给予生理盐水。感染后60 d，收集两组绵羊外周血，提取血清总RNA，利用小RNA高通量测序鉴定并筛选差异表达的miRNA。选取5个差异表达miRNA进行实时荧光定量逆转录PCR (qRT-PCR)验证，并采用Medcale软件绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算曲线下面积（AUC），筛选具有潜在诊断价值（AUC≥0.7）的miRNA。采用qRT-PCR检测15份细粒棘球蚴感染绵羊血清样品中具有潜在诊断价值的miRNA的转录水平，并计算曲线下面积（AUC）以及敏感性和特异性。采用miRanda和RNAhybrid软件对差异表达miRNA的靶基因进行预测，并进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）路径富集分析。结果 测序结果显示，共鉴定出26个差异性表达的miRNAs，其中21个上调表达，5个下调表达。qRT-PCR结果显示，感染组oar-miR-191、oar-let-7a、oar-miR-150、oar-miR-26a、oar-miR-21等5个相对丰度较高的差异miRNA的相对表达水平分别为2.22±0.31、2.12±0.24、2.42±0.35、2.09±0.15、3.23±0.83，均高于对照组（1.00±0.11），其中oar-miR-191、oarlet-7a、oar-miR-150、oar-miR-26a的相对表达水平与对照组差异有统计学意义（t=3.960、4.766、4.096、9.126，均P <0.05）。ROC曲线分析发现，oar-let-7a、oar-miR-26a、oar-miR-21的AUC均小于0.7。oar-miR-191的AUC为0.858(95%CI为0.719～0.997,P <0.05)，具有较高的诊断价值，其灵敏度为71.43%，特异性为85.71%;oar-miR-150的AUC为0.738 (95%CI为0.550～0.926,P <0.05)，具有一定的诊断意义，其灵敏度为53.33%，特异性为86.67%。GO显著性富集分析结果显示，转录水平上升两倍以上的miRNA靶基因主要与应激反应、细胞表面分子、蛋白质结合等功能相关；KEGG通路富集分析结果表明，转录水平上升至少两倍的miRNA靶基因主要富集在炎症反应、细胞自噬和细胞凋亡等关键信号通路上。结论 本研究筛选出oar-miR-191和oar-miR-150在细粒棘球蚴感染诊断中具有较好的灵敏度和特异性，有望成为细粒棘球病诊断的潜在生物标志物。

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