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FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 高鹏 1 ; 李志勇 1 ; 柳纪省 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词： 口蹄疫病毒;开放阅读框;腺病毒载体

期刊名称： 生物技术进展

ISSN： 2095-2341

年卷期： 2014 年 4 卷 02 期

页码： 107-112+153

摘要： 为研制O型口蹄疫病毒(FMDV)复制缺陷型腺病毒活载体疫苗毒株,通过RT-PCR方法获得了O型FMDV的开放阅读框(ORF)基因,并定向克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMVORF,经PCR、酶切及测序鉴定,克隆得到的ORF编码基因序列与原始强毒株O型FMDV的ORF编码基因相似性达99.8%。将含有目的基因的穿梭质粒线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-2共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细胞中,得到重组腺病毒质粒pAd-ORF,经PCR和酶切鉴定正确。本研究成功获得了含有现代O型疫苗用FMDV毒株的全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒及其腺病毒骨架质粒。

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