文献类型： 中文期刊

作者： 吴鹏杰 ¹ ; 金红岩 ² ; 徐进 ¹ ; 武江利 ¹ ; 李雨时 ¹ ; 郭岳琴 ¹ ; 姚军 ¹ ; 徐书法 ¹ ; 吴杰 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院蜜蜂研究所

2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 中华蜜蜂;SRP9;基因克隆;序列分析;结构预测;原核表达

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2016 年 59 卷 12 期

页码： 1332-1339

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】探究中华蜜蜂Apis cerana cerana信号识别颗粒9(signal recognition particle 9,SRP9)基因的序列,获得纯化的重组蛋白,为探究其蛋白功能奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法,以中华蜜蜂的c DNA为模板扩增中华蜜蜂SRP9基因编码区,并通过软件MEGA5.1构建系统发育树,运用Predice Protein和SWISS-MODEL等软件预测分析蛋白结构;用大肠杆菌Escherichia coli表达系统进行原核表达;采用尿素洗脱法进行重组蛋白纯化。【结果】扩增得到的中华蜜蜂SRP9基因编码区长为237 bp,命名为Acc SRP9。该基因编码78个氨基酸,编码蛋白的相对分子量为9.36 k D,等电点为9.17。系统进化树分析表明,Acc SRP9与西方蜜蜂Apis mellifera的SRP9和小蜜蜂Apis florea的SRP9聚成一支。蛋白质二级结构预测发现其含有2个α-螺旋区和3个β-折叠区。利用同源建模获得蛋白质的三维结构。将Acc SRP9连入表达载体p GEX-6P-1并在BL21(DE3)中进行原核表达,发现该重组蛋白表达在包涵体中,经蛋白纯化,最终获得了N端带GST标签的重组蛋白p GEX-6P-1-SRP9。【结论】本研究成功克隆了中华蜜蜂SRP9基因Acc SRP9,对其序列进行了分析,并获得了带有标签的重组蛋白,为进一步研究该基因的功能提供参考和材料。