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小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 钱榜 1 ; 刘振东 1 ; 赵印 1 ; 李静 1 ; PRAJAPATI Meera 1 ; 李彦敏 2 ; 孙跃峰 1 ; 窦永喜 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

2.西南民族大学畜牧兽医学院

关键词： 小反刍兽疫病毒;H蛋白;B细胞表位;化学发光免疫分析法

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2023 年 39 卷 005 期

页码： 120-129

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法.以H蛋白 4 个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价.结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10-6 μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为 10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于 10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测 247 份田间血清,两者相对符合率为 94.33%,但化学发光法敏感性更高.研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测.

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