文献类型： 中文期刊

作者： 陈玲玲 ¹ ; 张婷 ² ; 郝雨 ² ; 杨金柯 ² ; 史喜绢 ² ; 张大俊 ² ; 杨行 ² ; 赵登率 ² ; 闫文倩 ² ; 别鑫恬 ² ; 陈国辉 ² ; 郑海学 ² ; 乐涛 ¹ ; 张克山 ² ;

作者机构： 1.重庆师范大学生命科学学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

关键词： 非洲猪瘟病毒;D1133L蛋白;波形蛋白;蛋白互作;磷酸化

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 720-732

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）感染引起家猪和野猪的一种高死亡率的传染性疾病。ASFV具有庞大的基因组，其中非结构蛋白pD1133L被预测为其编码的6个解旋酶之一。本实验室应用免疫沉淀-质谱联用（immunoprecipitation-mass spectrometry,IP-MASS）技术筛选与pD1133L互作的宿主细胞蛋白，发现细胞波形蛋白（vimentin,VIM）为pD1133L互作的宿主蛋白之一，但尚不清楚宿主蛋白VIM对ASFV复制的影响。【目的】探究ASFV与VIM的相互调控作用，揭示VIM促进ASFV复制的机制。【方法】通过免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）试验验证pD1133L与VIM存在互作关系；外源过表达VIM蛋白以及设计并合成VIM的si RNA探究VIM对ASFV复制的影响；利用Western blotting以及荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）方法检测ASFV对VIM蛋白水平以及转录水平的影响；通过Western blotting、间接免疫荧光试验（immunofluorescence assay,IFA）探究巨噬细胞感染ASFV后VIM磷酸化水平变化以及亚细胞定位变化情况；CCK-8试剂盒检测VIM磷酸化抑制剂KN-93处理的最佳浓度，并利用Western blotting以及IFA检测KN-93对VIM磷酸化、亚细胞定位以及对ASFV复制影响。【结果】VIM过表达促进ASFV复制，敲低VIM的表达则抑制ASFV复制；ASFV感染抑制VIM蛋白水平以及转录水平表达，且呈时间依赖性；ASFV感染后VIM发生磷酸化修饰且发生亚细胞定位改变，从而促进ASFV复制。【结论】证实了ASFV与宿主蛋白VIM之间的相互调控作用；初步确定ASFV感染后VIM受到ASFV pD1133L调控，亚细胞定位发生重排向核周聚集从而促进ASFV复制的机制。