文献类型： 中文期刊

作者： 岳生赟 ¹ ; 王帅 ² ; 何伟 ² ; 王力 ² ; 刘仲藜 ² ; 曾巧英 ² ; 才学鹏 ³ ;

作者机构： 1.甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

2.;甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

3.;甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;

关键词： 日本血吸虫;胰岛素样多肽;真核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2017 年 07 期

页码： 805-809

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为克隆和表达日本血吸虫胰岛素样多肽基因(Sjilp)并制备特异性多克隆抗体,根据基因组注释信息,设计特异性引物,利用RT-PCR技术从日本血吸虫成虫m RNA中成功扩增出长度为588 bp的特异性c DNA序列,其CDS序列长393 bp。基于毕赤酵母密码子偏好性,对Sjilp基因密码子进行优化,构建p PIC9KSjilp重组表达载体,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达。SDS-PAGE与Western-blot检测结果显示,重组蛋白Sj-ILP获得高效表达,其大小约为15 ku,与预期结果一致。利用合成肽技术,设计并合成得到2条特异性的肽段,偶联KLH,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA检测其效价达到1︰51 200,Western-blot鉴定表明这2条特异性多肽具有良好的免疫原性。本试验为后续验证Sj-ILP与其结合蛋白的功能奠定了良好的基础。