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LC3蛋白敲除A549细胞系的构建及其对流感病毒复制的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 陆晨阳 1 ; 包旦奇 1 ; 马天馨 1 ; 牛世奇 1 ; 张婷 1 ; 任超超 1 ; 李雪松 1 ; 杨健美 1 ; 滕巧泱 1 ; 李泽君 1 ; 刘芹防 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： LC3蛋白;敲除细胞系;流感病毒;感染

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 30 卷 003 期

页码： 7-12

收录情况： 北大核心

摘要： 微管相关蛋白1轻链3(LC3)是一种在流感病毒感染过程中被病毒M2蛋白招募至细胞膜处聚集的宿主细胞自噬相关蛋白.为了解其在流感病毒感染过程中行使的功能,利用CRISPR/Cas9技术构建LC3蛋白缺失细胞系,用以观察病毒生长复制的差异.设计sgRNA并插入至核心载体LentiCRISPRv2中,与辅助质粒共同转染293T细胞行慢病毒的包装.包装完成后用以感染A549细胞并进行嘌呤霉素压力筛选,对存活细胞的LC3蛋白含量进行检测,结果显示具有嘌吟抗性的细胞中未检测到LC3蛋白条带,LC3敲除细胞系构建成功.运用核染色法对比敲除细胞和正常细胞的细胞活性,发现缺失LC3蛋白细胞活性小幅度下降.流感病毒感染两种细胞绘制生长曲线,缺少LC3蛋白的条件下病毒复制水平下降.本研究构建的LC3蛋白缺失细胞系能够为将来研究LC3蛋白在细胞自噬与病毒感染过程中发挥功能,以及分子机制的研究提供了良好的细胞模型.

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