文献类型： 中文期刊

作者： 陈英 ¹ ; 乔军 ¹ ; 孟庆玲 ¹ ; 钟文强 ¹ ; 刘田莉 ¹ ; 贡莎莎 ¹ ; 王熙凤 ¹ ; 黄运福 ¹ ; 才学鹏 ¹ ;

作者机构： 1.石河子大学动物疾病防控兵团重点实验室;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

关键词： 细粒棘球蚴;Eg HSP20抗原基因;克隆;表达;反应原性

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2018 年 07 期

页码： 1547-1552

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性。【方法】根据Gen Bank中Eg HSP20蛋白基因c DNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RTPCR扩增,将PCR产物克隆至p MD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。【结果】Eg HSP20 c DNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸。该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在39~53位和120~168位。SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 k Da的重组蛋白;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应。【结论】证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础。