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稳定表达脯氨酰寡肽酶基因的PK15细胞系的建立及其对口蹄疫病毒增殖的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 王姿逸 1 ; 茹毅 1 ; 卢炳州 1 ; 杨洋 1 ; 赵陇和 1 ; 李亚军 1 ; 李建斌 1 ; 李明桂 1 ; 马坤 1 ; 冷非凡 2 ; 郝荣增 1 ; 郑海学 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学 动物医学与生物安全学院

2.兰州理工大学 生命科学与工程学院

关键词： 脯氨酰寡肽酶(POP);PiggyBac转座子系统;PK15细胞;病毒增殖

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2025 年 65 卷 010 期

页码： 4458-4471

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]利用PiggyBac转座子系统构建稳定表达脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase,POP)基因的猪肾PK15 细胞系,并系统评估POP蛋白表达对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)增殖的影响.[方法]构建重组表达质粒,转染PK15 细胞后通过Western blotting检测目的蛋白表达;采用有限稀释法筛选获得稳定表达 POP 的单克隆细胞系,并利用 RT-qPCR 和Western blotting检测POP基因和蛋白表达的稳定性;通过Cell Counting Kit-8 试验评估筛选细胞系的细胞活力;综合运用Western blotting、RT-qPCR以及病毒滴度测定等方法,系统分析FMDV在稳定表达细胞系中的复制.[结果]成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15 单克隆细胞系;与对照细胞系相比,该细胞系的细胞活力无显著差异;单克隆细胞系传至P30 代时,POP蛋白表达水平保持稳定;接种病毒实验结果显示,FMDV在稳定表达POP的PK15 细胞系中的增殖水平显著高于对照组,并在不同代次细胞系中保持稳定.[结论]本研究成功构建了稳定表达POP蛋白的 PK15 细胞系,并证实该细胞系可显著促进 FMDV 的复制,为进一步解析 POP 蛋白促进FMDV复制的分子机制提供了实验材料.

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