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油菜叶绿体基因组同源重组片段的克隆及phb基因定点整合载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 张中林 1 ; 张景昱 2 ; 李轶女 1 ; 苏宁 1 ; 宋艳茹 1 ; 沈桂芳 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院生物技术研究所

2.中国科学院植物研究所

关键词： phb基因;叶绿体转化;同源片段;定点整合;油菜

期刊名称： 植物生理学报

ISSN： 0257-4829

年卷期： 2001 年 27 卷 03 期

页码： 235-242

收录情况： 北大核心

摘要： 利用叶绿体基因组在进化过程中高度保守的特点 ,根据烟草、水稻和玉米叶绿体基因组全序列资料 ,设计合成引物 ,PCR扩增并克隆了油菜叶绿体两个重要的功能基因rbcL和atpB(GenBank登录号分别为AF2 67640和AF2 67641) ,并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以来自叶绿体的强启动子PpsbA和Prrn等驱动PHB合成途径中 3个关键酶基因phbA、phbB和phbC ,分别构建表达盒 ,并将它们按照其在原始菌株中的自然转录顺序phbC phbA phbB相串联 ,最后连同选择标记基因aadA表达盒一起 ,克隆到油菜叶绿体同源片段中 ,构建成phb基因定点整合载体pRCABZ和pRCABF。酶切及Southern杂交结果证明所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。

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