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水貂犬瘟热病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 闫曼平 1 ; 商金源 1 ; 叶京飞 1 ; 罗国良 1 ; 王振军 1 ; 易立 1 ; 冯二凯 1 ; 王春霞 1 ; 赵宗正 1 ; 陈明军 1 ; 魏先力 1 ; 高华 1 ; 单晓枫 1 ; 程悦宁 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室;吉林农业大学动物科学技术学院;军事科学院军事兽医研究所;吉林省榆树市秀水镇畜牧站;通辽市科尔沁区动物疫病预防控制中心

关键词： 水貂犬瘟热病毒;微滴数字PCR;N基因

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2023 年 43 卷 012 期

页码： 2445-2450

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立检测水貂犬瘟热病毒(mink canine distemper virus,CDV)的微滴数字 PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量方法,以便提供水貂CDV在诊断检测方面的技术支持,本研究根据实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法原理,建立了水貂CDV数字PCR方法,并优化了反应条件,评估了特异性、敏感性以及重复性.结果表明:ddPCR方法检测CDV的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为55℃,升降温度为2.5℃/s,最低检测下限为4.4拷贝/μL;除CDV特异性扩增,其他常见病毒特异性检测结果均为阴性;重复性试验的变异系数均小于5%.采用该微滴数字PCR和荧光定量RT-PCR方法对30份犬、貂、狐、貉等组织(其中CDV阳性样品7份)样品进行检测,检测结果与临床检测结果相符.本研究建立的微滴数字PCR方法对CDV定量检测特异性强、灵敏度高,重复性好,可以用于水貂CDV临床样品的核酸检测,对水貂CDV发病早期的诊断提供新的定量检测方法.

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