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变异型禽呼肠孤病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 牛世奇 1 ; 武子华 1 ; 马天馨 1 ; 李雪松 1 ; 滕巧泱 1 ; 苑纯秀 1 ; 李泽君 1 ; 刘芹防 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： 禽呼肠孤病毒;间接ELISA;检测方法

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年 32 卷 006 期

页码： 50-56

摘要： 随着变异型禽呼肠孤病毒(ARV)不断分离出来，其严重威胁着我国养鸡产业发展，目前尚没有针对变异型ARV的血清学检测方法，且商品化试剂盒(INDEXX)检测不出变异株感染鸡后的阳性血清，因此为了建立能快速检测ARV血清抗体的ELISA检测方法。本实验利用分离到的ARV变异株在LMH细胞上增殖，对病毒进行灭活浓缩后作为包被抗原，对各种条件进行了优化，建立了检测ARV血清抗体的间接ELISA方法。结果显示：ARV的最佳包被浓度为1.25 μg/mL，血清最佳稀释倍数为1∶800，最佳包被条件为37℃、2 h后4℃过夜进行孵育，封闭液用1%BSA，血清最佳孵育条件为37℃、1.5 h，HRP标记羊抗鸡二抗的最佳稀释倍数为1∶8000，最佳孵育条件为37℃、1.5 h，并确定了临界值为0.442。该检测方法的特异性和敏感性较好，批内、批间重复率变异系数最大在5%左右，具有良好的重复性。变异型禽呼肠孤病毒抗体间接ELISA检测方法的建立为临床快速检测变异型ARV的抗体及疫苗免疫效价评估奠定基础。

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