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基于CRISPR/Cas9技术的全基因组基因编辑MDCK细胞文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 朱媛媛 1 ; 许榜丰 1 ; 闫鸣昊 1 ; 刘芹防 1 ; 滕巧泱 1 ; 苑纯秀 1 ; 李雪松 1 ; 李泽君 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： CRISPR/Cas9;MDCK细胞系;全基因组;基因编辑

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2024 年 32 卷 004 期

页码： 17-24

摘要： 本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，首先靶向犬全基因组设计合成转录sgRNA的DNA文库，并将DNA文库全部克隆于lentiCRISPR v2慢病毒转移载体上，高通量测序结果显示文库覆盖度高、均一性良好。将质粒文库和慢病毒包装系统质粒共转染293T细胞，收取含慢病毒样病毒的上清液感染MDCK细胞，在最适浓度嘌呤霉素筛选下，收集嘌呤霉素抗性细胞，冻存于-80℃，提取一部分细胞的基因组，通过PCR扩增转录sgRNA的DNA，将PCR产物插入到T载体后，挑取单克隆菌落，测序表明细胞文库中转录的sgRNA具有较好的覆盖度。本实验成功构建了犬全基因组范围转录sgRNA的质粒文库，并成功构建了MDCK细胞全基因组范围的基因编辑细胞库，该文库可作为后续筛选病毒复制关键宿主因子的细胞平台。

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