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过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增殖效率的评价

文献类型： 中文期刊

作者： 黄梦瑶 1 ; 杨帆 1 ; 杨洋 1 ; 邵文华 1 ; 王家丽 1 ; 吕岳芹 1 ; 赵晓义 1 ; 陈治彤 1 ; 曹伟军 1 ; 张伟 1 ; 郑海学 1 ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心

关键词： JMJD6;水疱性口炎病毒;慢病毒包装;过表达细胞系;干扰素

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 54 卷 005 期

页码： 569-576

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为提高水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建Jumonji C结构域蛋白 6(Jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)过表达的HEK-293T/JMJD6 细胞系,分析VSV在HEK-293T/JMJD6 细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异.首先以JMJD6 基因为目标,构建重组质粒pLV-puro-3×Flag-JMJD6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2 共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装.将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6 基因的阳性细胞.利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力.结果显示,在HEK-293T/JMJD6 细胞系中,VSV的复制能力显著增强.实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6 细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达,结果显示HEK-293T/JMJD6 细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生.总之,本研究构建的HEK-293T/JMJD6 细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路,为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础.

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