文献类型： 中文期刊

作者： 李亚军 ¹ ; 茹毅 ¹ ; 郝荣增 ¹ ; 秦晓东 ¹ ; 卢炳州 ¹ ; 杨洋 ¹ ; 刘华南 ¹ ; 张越 ¹ ; 龚真莉 ¹ ; 刘艳红 ¹ ; 余四九 ² ; 郑海学 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

2.甘肃农业大学动物医学院

关键词： 牛病毒性腹泻病毒;E^rns蛋白;真核表达;中华仓鼠卵巢（CHO）细胞悬浮培养;免疫原性

期刊名称： 生物工程学报

ISSN：

年卷期： 2023 年 012 期

页码： 4861-4873

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究利用中华仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV） E^rns蛋白，并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL标准毒株基因序列为基础，构建BVDV E^rns蛋白重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E^rns，转染悬浮培养的CHO细胞，进行上清分泌表达。SDS-PAGE分析E^rns蛋白的表达和纯化，并用抗His单克隆抗体和BVDV阳性血清进行Western blotting鉴定纯化蛋白；进一步使用纯化的E^rns蛋白免疫新西兰大白兔，通过间接酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）和细胞间接免疫荧光（indirect immunofluorescence,IFA）实验检测血清抗体水平及其免疫反应活性，用病毒中和实验测定免疫兔血清的中和抗体滴度。BCA蛋白定量试剂盒检测纯化的E^rns蛋白浓度为0.886 mg/m L,Western blotting结果显示，抗His单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的E^rns蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA实验结果显示，一免后第7天血清抗体呈阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平可达1:128 000，且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV病毒发生特异性免疫反应。重组E^rns蛋白免疫兔可诱导动物机体产生病毒中和抗体，中和效价为log10=2.71。本研究利用CHO细胞表达系统成功制备了纯化的BVDV E^rns蛋白，并通过体内和体外实验证明，该重组蛋白具有良好的免疫原性，为牛病毒性腹泻（bovine viral diarrhea,BVD）诊断方法及新型亚单位疫苗的研制奠定了基础。