文献类型： 中文期刊
作者： 孙赫 1 ; 王瑜 1 ; 蔄弘扬 1 ; 邱玥 1 ; 田园 1 ; 李泽鸿 1 ; 岳玉环 1 ;
作者机构： 1.中国农业科学院长春兽医研究所生物技术应用研究室;吉林农业大学生命科学学院
关键词： 流感病毒H5N1;M1蛋白;单分子抗体;真核表达;生物活性
期刊名称： 中国生物制品学杂志
ISSN： 1004-5503
年卷期： 2023 年 36 卷 009 期
页码： 1047-1053
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的 评价一种真核表达的抗H5N1-M1入胞单分子抗体(TAT-ScFv-mFc)的生物活性.方法 采用Western blot法及局域表面等离子共振技术(localized surface plasmon resonance,LSPR)分别检测TAT-ScFv-mFc与H5N1-M1蛋白的免疫结合活性及亲和力;CCK-8法检测TAT-ScFv-mFc对流感病毒H1N1的抑制作用;免疫荧光法检测TAT-ScFv-mFc对MDCK细胞的穿膜能力.雌性BALB/c小鼠尾静脉注射TAT-ScFv-mFc,200μL/只,共30只,于注射后5、60、120、240及360 min,断尾采血,分离血清,ELISA法检测血清效价,根据Origin 2021软件绘制的半衰期曲线计算半衰期.结果 TAT-ScFv-mFc与H5N1-M1蛋白可发生特异性结合,结合数率常数(Ka)达6.67× 104[1/(M*s)].经H1N1感染的MDCK细胞的存活率随着TAT-ScFv-mFc浓度增加而逐渐升高,且呈剂量依赖性,对H1N1的复制有明显抑制作用.TAT-ScFv-mFc可在短时间内穿过MDCK细胞膜,进入细胞内,结合病毒M1蛋白,从而抑制病毒的复制和组装.TAT-ScFv-mFc在小鼠体内的半衰期为212min.结论 TAT-ScFv-mFc具有与H5N1-M1良好的免疫结合活性及亲和力,可有效抑制H1N1的复制,对MDCK细胞膜有良好的穿透能力,且在小鼠体内半衰期较长,为H5N1感染的药物治疗、疫苗研究、预防治疗奠定了基础.
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