文献类型： 中文期刊

作者： 牛锐利 ¹ ; 宋哈楠 ² ; 吴月 ² ; 王育南 ² ; 高也凡 ² ; 关伟军 ² ; 宗宪春 ¹ ;

作者机构： 1.牡丹江师范学院生命科学与技术学院

2.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

关键词： 西门塔尔牛;表皮干细胞;分离培养;诱导分化

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 168-177

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在建立西门塔尔牛表皮干细胞（epidermal stem cell, EpSCs）分离培养体系，探究其生物学特性，为西门塔尔牛种质资源保存提供新方法，为干细胞治疗研究提供种子细胞。采用3～4月龄西门塔尔牛背部表皮，通过酶消化法和组织贴壁法两种方法分离培养西门塔尔牛EpSCs,绘制EpSCs生长曲线探讨其增殖能力。通过免疫荧光鉴定EpSCs表面标记物（ITG β1、P63和CD71）,通过RT-PCR分析EpSCs特异性基因（ITG β1、KRT19和ITG α6）表达情况。通过体外诱导EpSCs分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞检测其分化潜能。结果显示，组织块贴壁法获得的EpSCs纯度较低，酶消法获得的EpSCs纯度较高，细胞传代至P28代时开始逐渐老化。EpSCs细胞生长曲线呈“S”型。免疫荧光结果显示EpSCs表面特异性标记物ITG β1、P63和CD71呈阳性表达，RT-PCR结果显示EpSCs高度表达ITG β1、KRT19和ITG α6,不表达CD31基因。EpSCs诱导分化脂肪细胞时，产生可被油红O着色的脂滴，经鉴定细胞阳性表达脂肪细胞PPAR-γ和LPL特异性基因。EpSCs诱导分化成骨细胞时，形成可被茜素红染色呈橙红色的钙结节，且细胞阳性表达CollagenⅠ和RUNX2基因。EpSCs诱导分化软骨细胞时，透明状软骨基质经阿利新蓝染色呈蓝色，且细胞阳性表达软骨细胞特异性基因BGN和CollagenⅡ。上述结果表明，成功从西门塔尔牛胎牛表皮中分离得到生长状态良好的西门塔尔牛EpSCs,且具有向脂肪、成骨和软骨细胞等中胚层细胞分化的潜能，建立了西门塔尔牛EpSCs体外分离培养体系。