文献类型： 中文期刊

作者： 叶博 ¹ ; 岳冬梅 ¹ ; 李佩佩 ¹ ; 王林美 ¹ ; 张波 ¹ ; 范琦 ¹ ; 赵振军 ¹ ;

作者机构： 1.辽宁省海洋水产科学研究院

关键词： 柞蚕核型多角体病毒表达载体系统;柞蚕溶菌酶;分泌表达;蛋白纯化

期刊名称： 蚕业科学

ISSN： 0257-4799

年卷期： 2022 年 004 期

页码： 324-331

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统（AnpeNPV expression vector system）在柞蚕蛹体内分泌表达柞蚕溶菌酶（ApLz）,并建立重组蛋白的分离纯化方法。选用柞蚕30 kD蛋白信号肽构建分泌型转移表达载体pApBacDual-N1/L21Ap30kDSP,将Aplz基因克隆至该载体中，重组DNA转化感受态细胞DH10B/AnpeBac^Δcc,通过抗生素抗性及蓝白斑筛选获得重组杆粒AnpeBac^Δcc/phAplz,并经PCR检测确认。重组杆粒DNA转染Tn-Hi5细胞后得到具有感染性的重组病毒Anpe-NPV^Δcc/phAplz。重组病毒感染柞蚕蛹6～7 d后收集柞蚕蛹血淋巴，利用His-tag Purification Resin和StrepTrap HP亲和层析柱对重组ApLz进行两步分离纯化。重组ApLz经SDS-PAGE和Western blot鉴定、蛋白质N端测序分析以及抗菌活性检测，结果显示，重组ApLz可以通过AnpeNPV表达载体系统在柞蚕蛹中得到分泌表达，经过两步层析分离得到的重组ApLz纯度较高，信号肽切割位点与预测相符，纯化的重组ApLz对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌具有良好的抑菌活性。初步研究结果为利用柞蚕蛹规模化制备重组蛋白提供了依据。