炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吕双飞

作者： 吕双飞;马勋;王静;孔翠莲;寇丽君;刘彩霞;史唯地;康立超;任慧杰

作者机构：

关键词： 炭疽芽孢杆菌;PA-LF1基因;克隆;原核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 002 期

页码： 674-683

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】构建炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202 PA-LF1融合基因表达载体并对其进行原核表达和反应原性检测，为炭疽亚单位疫苗制备、炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供依据。【方法】根据GenBank中登录的炭疽芽孢杆菌PA和LF基因序列设计2对引物，利用PCR方法从炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202中分别扩增出PA和LF1基因片段，经XhoⅠ限制性内切酶消化后，通过黏性末端进行连接，获得PA-LF1融合基因片段，利用SWISS-MODEL分析软件分别对PA、LF1和PA-LF1融合蛋白进行三级结构预测；将融合基因片段克隆至pET32a（+）质粒中，构建重组质粒pET32a-PA-LF1,并将重组质粒pET32a-PA-LF1转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达，SDS-PAGE分析重组蛋白表达，Western blotting鉴定融合蛋白并分析其反应原性。【结果】从炭疽芽孢杆菌弱毒C40-202株成功扩增出PA、LF1和PA-LF1融合基因；成功构建了炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合基因表达质粒pET32a-PA-LF1,融合蛋白三级结构预测可折叠为正确的空间构象；构建的重组质粒经诱导表达、纯化和SDS-PAGE,获得分子质量为96 ku的融合蛋白，以包涵体形式表达；经Western blotting验证，纯化后的重组蛋白与经Ⅱ号炭疽芽孢苗免疫后的绵羊血清发生特异性结合，表明其具有良好的反应原性。【结论】PA-LF1融合蛋白具有良好的反应原性，可为炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供理论依据，同时也可作为一种炭疽亚单位疫苗的候选组分。

分类号： S852.616

  • 相关文献

[1]柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因的克隆、原核表达及酶活性分析. 廖申权,吴彩艳,戚南山,李娟,吕敏娜,张健騑,谢明权,孙铭飞. 2015

[2]牛干扰素-tau基因的原核表达及生物功能鉴定. 高方方,吴忠义,曾申明. 2008

[3]灰飞虱原肌球蛋白的基因克隆、原核表达及多克隆抗体制备. 徐秋芳,陈晴晴,倪海平,李硕,张金凤,周益军. 2014

[4]胸膜肺炎放线杆菌血清10型ApxIA基因的克隆及原核表达. 富亮,徐福洲,赵玉军,刘莹. 2006

[5]中国对虾Rab7全长cDNA的克隆及原核表达. 卢金凤,梁高峰,梁艳,黄倢. 2012

[6]甘蔗B家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSB的克隆及原核表达. 秦翠鲜,陈忠良,桂意云,李双喜,汪淼,廖青,李杨瑞. 2013

[7]柔嫩艾美耳球虫G6-PI基因的克隆、序列分析与原核表达. 刘田,廖申权,戚南山,吴彩艳,李娟,吕敏娜,李国清,孙铭飞. 2014

[8]龙眼14-3-3基因的克隆与原核表达. 游向荣,王平,梁文裕,郑少泉,陈伟. 2009

[9]花生病程诱导蛋白基因AhPIP1和启动子的克隆、序列分析及原核表达. 谢纯政,李万福,刘海燕,李玲,梁炫强. 2009

[10]猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因的克隆与原核表达. 蔡汝健,宋长绪,郝永清,杨鼎,何锦玲. 2009

[11]创伤弧菌铁调基因fur的原核表达及多克隆抗体制备. 李素一,张丽娟,陈华,柯翎,陈叙,林晨韬. 2016

[12]猪囊尾蚴排泄分泌抗原M13h基因的克隆及原核表达. 赵光辉,王秋霞,鲁琨,张改平,宁长申,王选年,张龙现,菅复春,宋海涛. 2008

[13]猪圆环病毒2型ORF2基因片段的克隆与原核表达. 祁艳华,王爱萍,李学伍,游雷鸣,史平玲,胡峰,张改平. 2010

[14]鸡新城疫病毒Lasota株HN蛋白主要抗原表位基因在大肠杆菌中的表达. 赵坤,王选年,赵德明. 2008

[15]柔嫩艾美耳球虫Cytbc1基因的克隆、序列分析及重组表达. 张晨旭,廖申权,戚南山,吴彩艳,李娟,吕敏娜,林栩慧,吴玄光,孙铭飞. 2016

[16]花生羧酸酯酶AhCXE的克隆与原核表达. 黄桃鹏,许焕焕,李海良,李海芬,李玲,梁炫强. 2017

[17]龙眼成花逆转花芽α-tubulin基因的克隆与原核表达. 黄榕辉,王喜军,黄春梅,梁文裕,陈伟. 2011

[18]龙眼转醛醇酶基因的克隆与原核表达. 游向荣,许鸿川,梁文裕,郑少泉,陈伟. 2009

[19]花生防御素基因的克隆及原核表达. 李万福,刘海燕,钟旎,梁炫强. 2009

[20]加州鲈卵泡抑素cDNA的克隆、分析和原核表达. 李胜杰,白俊杰,叶星,劳海华,简清. 2007

作者其他论文 更多>>

微信小程序