细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 贾新月

作者： 贾新月;马静;张艳艳;马勋;王正荣;薄新文

作者机构：

关键词： 细粒棘球绦虫;EGR-07243基因;EGR-07244基因;生物信息学分析;原核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 847-858

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】分析细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus）2个Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因EGR-07243和EGR-07244的生物信息学特性，并进行原核表达，以期检测EGR-07243和EGR-07244蛋白的免疫原性。【方法】利用PCR扩增EGR-07243、EGR-07244基因全长序列，采用生物信息学软件对EGR-07243、EGR-07244蛋白的理化性质、结构特点及亲缘进化关系进行分析；构建重组质粒pET32a-EGR-07243、pET32a-EGR-07244并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，利用SDS-PAGE检测蛋白的表达，并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析。【结果】EGR-07243基因全长228 bp,编码75个氨基酸，蛋白分子式为C686H1146N228O292S63,相对分子质量约19 258,含有3个B细胞抗原表位，理论等电点为5.30,脂肪系数为17.98,亲水性为0.714,为稳定蛋白；EGR-07244基因全长228 bp,编码75个氨基酸，蛋白分子式为C675H1124N228O287S56,相对分子质量约18 800,含有3个B细胞抗原表位，理论等电点为5.32,脂肪系数为20.61,亲水性为0.689,为稳定蛋白。二者氨基酸序列相似性为72.00%。二者与绦虫属的功能结构域氨基酸序列一致性为95%以上，亲缘关系极近；而与人的功能结构域氨基酸序列一致性为46.3%,亲缘关系较远。通过双酶切鉴定及测序分析证明，pET32a-EGR-07243、pET32a-EGR-07244重组质粒构建成功。重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后成功诱导表达蛋白，Western blotting结果显示，2种蛋白能被感染原头蚴的犬阳性血清识别且不被健康犬血清识别，表明其均具有良好的反应原性。【结论】EGR-07243和EGR-07244蛋白能够作为预防细粒棘球绦虫感染的疫苗免疫靶点，结果为抗包虫病疫苗候选分子的筛选提供了试验材料。

分类号： S852.7

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