沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用
文献类型: 中文期刊
第一作者: 胡国君
作者: 胡国君;张尊平;范旭东;任芳;翟秀丽;时晓燕;董雅凤
作者机构:
关键词: 葡萄;沙地葡萄茎痘伴随病毒;巢式RT-PCR;双重巢式RT-PCR
期刊名称: 中国果树
ISSN: 1000-8047
年卷期: 2022 年 008 期
页码: 39-43
收录情况: 北大核心
摘要: 根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了 2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp.通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了 GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法.采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53 和 RSP 9F/9R 的合计检出率为 65.1%,2 组单一巢式 PCR 引物 repF1/R1-repF2/R2 和 cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%.该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测.
分类号: S436.631.1+9
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