科研产出
阿维菌素荧光衍生反应影响因子的研究
《分析化学 》 2006 SCI 北大核心 CSCD
摘要：论文研究与探讨了不同温度(-20℃、0℃、20℃、40℃、60℃)、光照(0 Lux,123.8 Lux,1665.5 Lux,1108.2 Lux)、反应时间(1~720 m in)、衍生试剂浓度等因子对阿维菌素荧光衍生反应的影响。研究结果表明,环境温度对衍生反应影响不显著;衍生反应对太阳光线敏感,其机理是阿维菌素衍生产物易快速发生光解;高浓度的衍生试剂对反应表现一定抑制作用;衍生反应在30 m in左右达到峰值,其产物在室温、避光条件下8 h内保持稳定。
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干旱胁迫下水稻柱头外露率加性、上位性效应和Q×E互作的剖析(英文)
《遗传学报 》 2006 SCI 北大核心 CSCD
摘要：在耐旱性筛选设施内对一套水稻重组自交系群体(共185个株系)进行两年的水分胁迫和非胁迫处理,调查每穗颖花数(SNP)、单边柱头外露率(PSES)、双边柱头外露率(PDES)和柱头总外露率(PES)等4个开花相关性状。方差分析结果显示年份、株系和水分处理,以及相互间互作的效应均达显著水平。表型相关以PSES和PES间最高(r=0.9752***),其次为PDES和PES(r=0.7150***),最次为PSES和PDES间(r=0.5424***)。利用203个SSR标记建立的连锁图,胁迫和非胁迫条件下各检测到6个SNP的主效QTL,3～4个PSES、PDES和PES的主效QTL;检测到1～9对上位性QTL影响颖花数和柱头外露率。大部分加性和上位性效应的贡献率较低(0.76%～9.92%),仅有少数QTL或上位性QTL解释总方差的10%以上。一些主效和上位性QTL在PSES、PDES和PES间被共同检测到,解释了不同柱头外露率指标间高度正相关关系。几乎没有在水分胁迫和非胁迫两种条件下都检测到的QTL,暗示着干旱对颖花数和柱头外露率有严重的影响。
关键词： 水稻 柱头外露率 水分胁迫 数量性状基因座(QTL) 上位性 QTL-环境互作
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两种供氮水平下水稻生长后期相关性状的QTL定位(英文)
《遗传学报 》 2006 SCI 北大核心 CSCD
摘要：以特青为母本与Lemont杂交,然后用特青为轮回亲本回交,建立特青背景下的染色体片段置换系(CSSL)群体。在正常和低氮条件下分别在生长后期对株高(PH)、单株穗数(PN)、叶绿素含量(CC)、地上部干物重(SDW)和单株籽粒产量(YD)等性状进行了QTL分析,共检测到31个QTL。其中在正常供氮水平下控制PH、PN、CC、SDW和YD的QTL 数目均为 3 个;在低氮水平下检测到 5、4、5 和 2 个影响 PH、PN、CC 和 SDW 的 QTL,在低氮水平下没有检测到控制YD的位点。大部分QTL集中在第2、3、7、11和12染色体上,影响不同性状或在两种供氮水平下影响同一性状的QTL 在染色体上成串或成簇分布。其中 RM30-RM439、RM18-RM478、RM309-RM270、RM235-RM17 等区域同时检测到控制两个以上性状的 QTL,表现出明显的一因多效现象。推测仅在低氮水平下检测到的 QTL 可能跟水稻对低氮胁迫耐性有一定的关联。
关键词： 水稻 氮肥 数量性状座位(QTL) 染色体片段置换系(CSSL) 基因定位
信号肽序列对毕赤酵母表达外源蛋白质的影响
《生物化学与生物物理学报 》 2003 SCI 北大核心 CSCD
摘要：乙醇氧化酶启动子被分离、克隆 ,并建立了转化方法后 ,毕赤酵母已被发展成为一种高效的外源蛋白表达宿主。为了进一步提高外源蛋白质的分泌表达 ,对信号肽序列进行了研究。首先按毕赤酵母的偏爱密码合成了酿酒酵母的α因子信号肽序列MF4I,随后在MF4I信号肽序列的N端分别引入 1～ 10个毕赤酵母Aox1蛋白质的N端氨基酸 ,构成 10种不同的分泌信号肽序列 ,10种不同的分泌信号肽序列被用于植酸酶基因的毕赤酵母分泌表达。以上新的信号肽序列都可使植酸酶的分泌表达量增加 ,而以N端增加A、I、P三个氨基酸的信号肽序列引起的提高最大 ;和野生型的酿酒酵母α因子信号肽序列相比 ,使植酸酶分泌表达量增加 5倍 ,摇瓶中植酸酶的分泌表达量为 90mg/L。此外在MF4I信号肽的引导序列和内切蛋白酶间增加了EEAEAEAEP和K共 10个氨基酸 ,进一步提高信号肽的分泌效率 ,使表达又提高约 35 % ,使得摇瓶中酸性植酸酶的表达量达到 12 0mg/L ,是pPCI9K表达量的 8倍。
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泛肽交联酶(E_2)通过苯丙氨酸解氨酶基因启动子参与水稻对紫外光的防护(英文)
《Acta Botanica Sinica 》 2003 SCI 北大核心
摘要：迄今为止,诱导苯丙类化合物和黄酮类化合物合成并造成类黄酮的积累被认为是植物抵御紫外光的惟一主要的途径。苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苯丙类化合物合成的关键酶。通过体内足印试验表明,在pal-1基因启动子中有一段序列CTCCAACAACCCCTTC可以作为顺式元件参与紫外信号的传递。为了克隆与其相对应的反式因子,我们使用了酵母单杂交体系进行筛选。在鱼饵质粒中,我们将3个拷贝的顺式元件序列串联并与酵母异细胞血红素C(CYC)基本启动子连接。将鱼饵质粒和水稻cDNA表达质粒库共同转化到同一酵母中,通过筛选鉴定,克降到一些编码泛肽交联酶(E2)基因。氦基酸同源性分析表明,该酶E2(RE2)与其他物种的泛肽交联酶具有很高的同源性。水稻泛肽交联酶受紫外光诱导加速合成。当RE2与水稻核蛋白进行交联反应后能与pal-1基因中顺式元件CTCCAACAACCCCTTC专一结合。从这些结果可以推测水稻泛肽交联酶RE2可能通过苯丙类化合物的合成代谢参与对紫外光的防护。
关键词： 水稻泛肽交联酶 紫外防护 顺式元件 酵母单杂交体系
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通过体外分子进化技术获得耐高温β-葡萄糖苷酸酶的研究
《遗传学报 》 2002 SCI 北大核心 CSCD
摘要：采用高保真聚合酶从质粒pBI12 1中扩增出 1.8kb的专一条带 ,克隆入pBluescriptSK载体 ,测序结果显示与报道一致。该克隆GUS基因被用作对照 ,再以此为模板 ,通过DNA重排技术 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR重新得到大量的突变GUS基因。这些突变的GUS基因构建入原核表达载体pG2 5 1中 ,电击转化大肠杆菌菌株DH5α ,构建GUS基因突变体库 ,经过 3轮的重排、筛选得到 80℃处理 30分钟仍显示较高活性的耐高温GUS基因GUS3 3,基因测序显示 ,GUS3 3与GUS基因之间的同源性为 99.2 % ,核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,11个氨基酸发生了突变 ,80 %的突变集中在蛋白的C端。Tm值GUS3 3为 80℃ ,GUS ck为 5 5℃ ,提高了 2 5℃ ,GUS3 3β -葡萄糖苷酸酶热稳定性有了很大的提高 ,GUS3 3酶的最适温度明显提高。
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应用毕氏酵母高效表达耐高温植酸酶
《生物化学与生物物理学报 》 2002 SCI 北大核心 CSCD
摘要：自然界很难获得大量的耐高温植酸酶。采取连续延伸PCR方法 ,按照毕氏酵母的偏爱密码 ,合成 1.3kb烟熏曲霉耐高温植酸酶基因 fphy。合成基因与野生型基因核苷酸序列同源性为 74 % ,但编码的氨基酸序列一致。将耐高温植酸酶基因fphy插入毕氏酵母高效表达载体 pPIC9中 ,与分泌信号肽序列融合 ,通过同源重组将耐高温植酸酶基因整合到酵母染色体中 ,通过SDS PAGE检测和表达产物的酶活性筛选 ,得到重组转化子 ,证明植酸酶获得有效分泌和高效表达。经过 5L小罐高密度发酵 ,蛋白质表达量为 5 .6 g/L ;每毫升发酵液中植酸酶的活力单位达 130 0 0 0u ;表达产物耐高温性很强 ,90℃处理 80min后仍有 4 0 %的活性。
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水稻加工品质数量性状基因座(QTLs)分子定位研究
《遗传学报 》 2002 SCI 北大核心 CSCD
摘要：检测了Lemont/特青RI群体 2 12个株系的糙米率 (BR)、精米率 (MR)和整精米率 (HR)等 3项加工品质性状 ,利用RFLP连锁图和线性模型的复合区间作图方法 (QTLMapperV1.0 )进行QTL定位研究。群体呈连续分布 ,双向超亲现象明显 ,HR较BR、MR变异范围更大并偏向低值方向 ;分别检测到 1个MR、4个HR主效QTL ,其中QHr6和QHr7等 2个基因座具有较大遗传效应 ;分别检测到 12对影响BR、5对影响MR、16对影响HR的上位性基因座 ,上位性效应的影响大于主效QTLs,不同性状或同一性状上位性效应通过共同的区间形成复杂的互相联系
关键词： 水稻 重组自交系(RILs) 加工品质 主效QTL 上位性基因座
苏云金芽孢杆菌cryIA(c)Bt基因的合成及其在大肠杆菌中稳定表达
《生物化学与生物物理学报 》 2001 SCI 北大核心 CSCD
摘要：选用荧光假单胞菌偏爱密码 ,设计长 90bp左右的寡核苷酸引物 ,采用连续延伸PCR方法 ,合成了全长1.8kb的苏云金芽孢杆菌cryIA(c)Bt基因。合成基因消除了潜在的 polyA加尾序列、mRNA不稳定序列以及发夹结构。和Perlak[1] 发表的序列相比 ,合成的cryIA(c)Bt基因改动了 6 14个核苷酸 ,G +C的含量从 37.2 %上升到6 4%。将合成基因由tac启动子调控 ,构建成Bt表达载体 pYPBts,转化大肠杆菌后 ,在菌体内大量合成 6 6kD大小的蛋白质分子 ,其含量占菌体总蛋白质的 30 %。生物测定结果表明 ,表达的蛋白质对菜青虫三龄幼虫有很高的杀灭活性 ,LD50 为 0 .0 2 4μg/cm2 。
关键词： 化学合成 cryIA(c)Bt 基因表达 杀虫活性
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细菌乙酰胆碱氧化酶基因(codA)在烟草的表达与抗盐能力的分析
《生物化学与生物物理学报 》 2001 SCI 北大核心
摘要：将土壤细菌 (A .globiformis)的乙酰胆碱氧化酶 (COD)基因 (codA)通过农杆菌介导转入到烟草中 ,应用抗性筛选获得了抗性植株。PCR检测结果表明 :codA已整合到抗性植株染色体中 ;Western印迹鉴定及金标免疫分子定位的结果表明 :乙酰胆碱氧化酶基因 (codA)在转基因烟草中得到表达 ,表达产物COD定位在叶绿体中。通过对转基因植株的抗盐能力分析 ,结果表明转基因植株比对照植株具有更高的抗盐性 ,其中幼小植株 (1.0～ 1.5cm)可在 40 0mmol/LNaCl的培养基上存活 30天以上 ,并获得具有一定抗盐性状的转基因植株 (T4 40 0 ) ,能在30 0mmol/LNaCl浓度下较好生长 ;较大植株 (6～ 8cm)能在 40 0mmol/LNaCl浓度下较好生长
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