文献类型: 中文期刊
作者: 李科茫 1 ; 周金柱 2 ; 周俊明 2 ; 牛贝贝 2 ; 武琦 2 ; 郭容利 2 ; 张雪寒 2 ; 朱雪蛟 2 ; 李彬 2 ; 粟硕 1 ;
作者机构: 1.南京农业大学动物医学院
2.江苏省农业科学院兽医研究所
关键词: 猪A群轮状病毒;单克隆抗体;VP6蛋白
期刊名称: 畜牧与兽医
ISSN: 0529-5130
年卷期: 2023 年 004 期
页码: 79-85
收录情况: 北大核心
摘要: 旨在通过RT-PCR扩增猪A群轮状病毒(group A rotavirus, RVA)VP6基因节段,并克隆至pET28a-SUMO,构建原核表达载体pET28a-SUMO-VP6,将该重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、镍柱亲和层析纯化以获得重组蛋白SUMO-VP6,Western blot验证该重组蛋白能够与小鼠抗轮状病毒血清反应。将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,Western blot和间接免疫荧光验证阳性杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体与RVA的反应性。经3轮亚克隆最终获得一株能稳定分泌针对VP6蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株5G9,其分泌的单抗亚类为IgG1,轻链类型为Kappa,制备的小鼠腹水效价可达1∶4 096 000,能够与不同基因型的RVA反应,同时不与常见的猪腹泻相关病毒反应,为未来猪RVA相关基础研究、临床血清学检测方法的开发奠定了基础。
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