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川芎α-淀粉酶抑制剂基因的原核表达与条件优化

文献类型： 中文期刊

作者： 邓楷煜 1 ; 安秋菊 1 ; 陈安琪 1 ; 俞继华 1 ; 张富丽 2 ; 廖海 1 ;

作者机构： 1.西南交通大学生命科学与工程学院

2.四川省农业科学院质量标准与检测技术研究所

关键词： 川芎;α-淀粉酶抑制剂;原核表达;条件优化

期刊名称： 生物学杂志

ISSN： 2095-1736

年卷期： 2022 年 39 卷 004 期

页码： 7-11,17

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用实验室前期已获得的α-淀粉酶抑制剂基因(LASI),将其分别连接到不同载体上构建重组原核表达质粒,在原核表达系统中诱导表达LASI重组蛋白,并优化其诱导条件.通过Western Blot分析鉴定LASI重组蛋白,并采用碘-淀粉呈色法测定LASI对猪源淀粉酶的抑制活性.结果表明:pET28a是LASI的较好表达载体,当诱导时间为8 h,IPTG终浓度为1.0 mmol/L,诱导温度为27℃时,LASI重组蛋白的表达量达到最佳;在最优的诱导表达条件下,表达出的部分LASI重组蛋白以可溶性蛋白的形式存在,并能够与HIS标签单抗杂交;经纯化后获得的LASI重组蛋白对猪源淀粉酶存在抑制作用,终抑制比为34%.研究优化LASI重组蛋白的表达条件,获得足量的LASI重组蛋白,为进一步研究LASI的功能奠定基础.

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