文献类型： 中文期刊

作者： 陈咏琪 ¹ ; 尹延萍 ¹ ; 冯嘉伟 ¹ ; 白新宇 ¹ ; 李庆荣 ² ; 钟仰进 ¹ ; 杨婉莹 ¹ ;

作者机构： 1.华南农业大学动物科学学院广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室

2.广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所

关键词： 家蚕;RNA干扰;dsRNA;RNAi效率相关核酸酶;BmREase;dsRNA外切酶

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 303-311

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】鳞翅目（Lepidoptera）昆虫消化系统存在的核酸酶是导致RNAi低效的主要原因之一，本研究旨在探索家蚕Bombyx mori RNAi效率相关核酸酶（RNAi efficiency-related nuclease, REase）BmREase对家蚕RNAi低效的影响。【方法】利用RT-PCR对家蚕BmREase cDNA全长序列进行同源克隆和生物信息学分析，并采用最大似然法进行系统发育分析；利用qRT-PCR检测BmREase在游走期家蚕不同组织（头、表皮、脂肪体、中肠、气管、马氏管和丝腺）中的特异性表达。通过向游走期家蚕注射BmREase,家蚕蜕皮激素受体（ecdysone receptor, EcR）基因BmEcR,超气门蛋白（ultraspiracle, USP）基因BmUSP和细胞因子sp?tzle1（BmSpz1）基因BmSpz1的dsRNA进行RNAi,分析干扰BmREase表达后是否可以提高靶基因dsRNAs的干扰效率。【结果】RT-PCR扩增得到家蚕BmREase（GenBank登录号：XM＿021350017.2）全长cDNA序列，其ORF长2 241 bp,编码746个氨基酸残基；生物信息学分析发现，BmREase与人核酸外切酶I 3qe9.1具有极其相似的结构，其Thr7, His33, Ala37, Arg93, Lys97, Tyr159, Asp160, Ser161和Asn174组成的活性结构域能够与核苷酸序列结合，暗示BmREase具有核酸酶活性。qRT-PCR结果显示，BmREase在家蚕游走期的中肠和马氏管中高表达，说明BmREase主要在家蚕消化系统中表达。在家蚕游走期注射dsRNA,BmREase的表达量比空白对照组的高，RNAi干扰BmREase提高了dsBmEcR, dsBmUSP和dsBmSpz1的干扰效率。【结论】家蚕体内存在与人类核酸外切酶相似功能的酶BmREase,其存在可能影响dsRNA在家蚕体内的干扰效果。本研究为利用RNAi进行家蚕基因功能的研究以及进一步开发RNAi防治害虫具有指导性意义。