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一个水稻黄绿叶突变体的鉴定与基因克隆

文献类型: 学位论文

年份: 2015

导师姓名: 刘文真

作者: 梅家松

出版单位: 中国农业科学院

关键词: 水稻;叶色;图位克隆;叶绿体茎环结合蛋白

研究方向: 生物化学与分子生物学

摘要: 叶色突变体是研究光合作用的重要材料。在以日本晴为受体的转基因株系中发现了一个黄绿叶突变体。本研究以该突变体为研究对象,开展了表型鉴定、遗传分析、基因克隆和初步功能分析的研究。主要研究结果如下:突变体从苗期至成熟期一直表现为黄绿叶表型,因此将该突变体命名为ygl12。叶绿素含量分析显示,与野生型相比,突变体叶绿素含量在不同时期均低于野生型,其中叶绿素a的含量降低幅度最大。光温敏实验显示突变表型对光照强度敏感,但对温度钝感。叶绿体超微结构分析表明突变体的叶绿体发育异常。与野生型相比,突变体有开花时间延迟,有效分蘖数、结实率、千粒重减小,剑叶变长变宽,主穗变长等表型。遗传分析表明突变性状是由一对核隐性基因所控制。潮霉素分析表明突变性状并不是T-DNA插入引起的,因此我们采用图位克隆的方法克隆目的基因。利用突变体ygl12与龙特甫的杂交构建了用于图位克隆的定位群体,利用21个F2代突变个体,首先将突变基因初定位于12号染色体SSR标记ML7与L55之间大约6.5c M的区段。利用F2代中的突变个体共1776个,构建ygl12附近的高密度物理图谱。最终将目标基因定位于插入删除标记YG4与YG5两标记之间76.5kb的区段。水稻基因组自动注释计划网站上发现该区段有12个ORF,测序发现在LOC_Os12g23180基因有39bp的删除。推测LOC_Os12g23180即为目标基因。通过互补试验验证了我们的推测。荧光定量PCR试验发现ygl12中大部分参与叶绿素合成的基因转录本含量上调,这可能暗示目标基因在叶绿素含量维持上有重要作用。不同部位的荧光定量PCR试验发现ygl12主要在绿色组织中表达,在叶片中表达量最高。亚细胞定位试验发现目的蛋白位于叶绿体中。该蛋白与拟南芥中结合RNA的的RNA茎环结合蛋白CSP41b具有同源性,这暗示在水稻中YGL12蛋白可能与拟南芥中的CSP41b蛋白以同样的方式调控相关生化过程。本研究为将来深入研究该基因在水稻中的功能打下了坚实的基础。

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