文献类型： 中文期刊

作者： 李春燕 ¹ ; 张翠绵 ¹ ; 柴建芳 ¹ ; 秘彩莉 ¹ ; 马秀英 ¹ ; 赵和 ¹ ; 吕孟雨 ¹ ; 周硕 ¹ ; 董福双 ¹ ; 刘永伟 ¹ ; 杨帆 ¹ ; 王海波 ¹ ;

作者机构： 1.河北省农林科学院遗传生理研究所河北省植物转基因中心;河北师范大学生命科学学院

关键词： 小麦;麦谷蛋白亚基;SDS-PAGE;优化;分离方法

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2019 年 04 期

页码： 32-36

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 小麦高分子量、低分子量麦谷蛋白亚基组成是影响小麦加工品质的重要因素,为了经济快速鉴定小麦高低分子量麦谷蛋白亚基组成,需要不断对提取和分离这些蛋白的方法进行优化。在Singh等提出的提取分离小麦高低分子量麦谷蛋白亚基方法的基础上,对其中涉及的单体蛋白去除、麦谷蛋白还原和烷化过程中使用的异丙醇浓度、烷化剂浓度以及烷化过程能否简化几个关键因素进行了深入研究。结果表明:在麦谷蛋白还原时,在10%～50%的异丙醇浓度范围内,不同浓度的异丙醇对高分子量麦谷蛋白亚基的提取效果没有差别,而低分子量麦谷蛋白亚基在用低浓度异丙醇提取时效果较差,随异丙醇浓度提高,提取效果逐渐提高,异丙醇浓度提高到30%时,提取效果达到最高,异丙醇浓度继续提高到50%,提取效果不再提高;使用30%和50%的异丙醇,去除单体蛋白的效果相同;把烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化,不同浓度(0. 6%～1. 4%)的烷化剂处理麦谷蛋白亚基的烷化效果相同,但烷化剂浓度为1. 4%时电泳背景较重。优化后的方法为:在单体蛋白去除和麦谷蛋白还原时把异丙醇浓度由原来的50%降为30%,去掉单独的烷化步骤,把0. 6%的烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化。优化后的方法不但减少了试剂用量,简化了提取步骤,还提高了电泳条带强度。