文献类型： 中文期刊

作者： 宋祖晨 ¹ ; 孟飞 ¹ ; 张丹丹 ¹ ; 王飞飞 ¹ ; 刘雅茹 ¹ ; 陈艳 ¹ ; 乔传玲 ¹ ; 陈化兰 ¹ ; 杨焕良 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

关键词： H3N2流感病毒;PR8;反向遗传技术;生物学特性;疫苗株

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2021 年 010 期

页码： 1103-1107

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒（SIV）GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种SPF胚,经血凝试验、测序筛选获得了一株重组病毒GX1659/PR8。该重组病毒在鸡胚传20代,血凝价均能达到8 log2以上。每5代病毒的全基因组经PCR和测序鉴定,结果显示,PCR产物均无任何缺失或突变,表明GX1659/PR8具有遗传稳定性。分别利用100 EID₅₀剂量的GX1659和GX1659/PR8感染鸡胚,在不同时间测定鸡胚尿囊液的血凝效价和EID₅₀,绘制其生长曲线。结果显示,GX1659和GX1659/PR8分别在接种后60 h和48 h时血凝效价达到峰值,GX1659/PR8效价滴度明显高于亲本病毒GX1659。利用亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8的抗原和阳性血清进行交叉HI试验,测定HI效价及交叉HI效价并对抗原性进行分析。结果显示,亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8抗原性无明显差异。本研究拯救出一株具有稳定遗传性和高增殖性能的H3亚型重组病毒GX1659/PR8,为H3N2亚型流感病毒疫苗株的构建奠定了重要基础。