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兔出血症病毒基因组的克隆及克隆基因的酶切图谱

文献类型： 中文期刊

作者： 袁世山 1 ; 徐为燕 2 ; 杜念兴 2 ; 高谦 2 ; 陈章良 2 ;

作者机构： 1.南京农业大学兽医微生物教研室

2.南京农业大学兽医微生物教研室,南京农业大学兽医微生物教研室,南京农业大学兽医微生物教研室,北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室,北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

关键词： 兔出血症病毒;ssDNA;基因组克隆;酶切图谱

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 1992 年 03 期

页码： 245-251

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本试验用甘油-酒石酸钾密度梯度离心纯化了兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV),所得病毒制剂实心颗粒占90％,没有宿主核酸污染。在常规SDS-蛋白酶K法的基础上,建立了一种耗时短、重复性高的RHDV核酸抽提程序。按照细小病毒基因组的特性,在体外合成了RHDV dsDNA,证明兔出血症病毒基因组是具有3′端发夹结构的ssDNA。以核酸酶S1修饰RHDV dsDNA,将其克隆入BS质粒载体,转化大肠杆菌DH5株。经筛选鉴定,共得RHDV DNA克隆23个,其中最大者(pYC-2)为4.6kb。选用18种限制性内切酶作酶谱分析,结果表明,12种酶在pYC-2克隆基因上不存在切点;以双酶法,用Cla Ⅰ、HincⅡ,Pvu Ⅰ、Bgl Ⅱ和Hpa Ⅰ绘制出pYC-2DNA的酶切图谱。

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