文献类型： 中文期刊
作者： 夏叶 1 ; 孙莹慧 1 ; 李春华 1 ; 缪德年 1 ;
作者机构： 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所
关键词： 单核细胞增生李斯特菌;SigB蛋白;原核表达;多克隆抗体
期刊名称： 上海农业学报
ISSN： 1000-3924
年卷期： 2022 年 38 卷 001 期
页码： 1-5
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为制备单核细胞增生李斯特菌SigB蛋白及其多克隆抗体,采用PCR方法扩增参考菌株10403S的sigB基因片段,并克隆至原核表达载体pET-30a构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞进行原核表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化SigB蛋白,通过免疫兔体获得多克隆抗体.结果表明:成功构建SigB重组质粒,并诱导表达出可溶性SigB蛋白,其相对分子质量约30 ku,纯化后的SigB蛋白质量浓度约为1.5 mg∕mL,获得的多克隆抗体效价为1:51200.经Western-blot验证,该多克隆抗体能特异性检测SigB蛋白,表现出良好的抗体特异性.本研究可为探究单增李斯特菌的应激调控机制奠定基础.
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