文献类型： 中文期刊

作者： 李辉玲 ¹ ; 董洁 ¹ ; 张国儒 ² ; 火顺利 ¹ ; 叶远荣 ¹ ; 杜珊珊 ¹ ; 张建文 ¹ ;

作者机构： 1.巴音郭楞蒙古自治州农业科学研究院

2.新疆农业科学院园艺作物研究所

关键词： 色素辣椒;InDel-PCR;反应体系;引物筛选;扩增产物;参数优化

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2021 年 49 卷 018 期

页码： 72-76

收录情况： 北大核心

摘要： 为建立和优化色素辣椒的InDel标记PCR反应体系,筛选多态性良好且重复性高的引物,为InDel分子标记在色素辣椒辅助育种、品种纯度鉴定及遗传多样性分析等提供可靠的技术支持.采用正交试验、单因素试验方法,对影响扩增体系中的模板DNA用量、引物浓度、2×Taq PCR Mix添加量等参数进行3因素4水平的正交试验比较分析,对循环数进行单因素试验优化分析.结果表明,对InDel-PCR体系扩增结果的影响程度中引物浓度最大,其次是模板DNA用量,而2×Taq PCR Mix添加量的影响不大.根据检测结果,出于成本和模板DNA用量的考虑,确定最佳InDel-PCR反应体系(10μL):模板DNA用量为35 ng、引物浓度为0.5μmol/L、2×Taq PCR Mix添加量为5μL.扩增程序:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,退火30 s,72℃变性60 s,35个循环;72℃变性5 min;扩增产物在4℃保存.从240对InDel通用引物中最终筛选出14对适用于色素辣椒InDel-PCR候选引物.InDel标记是基于PCR的分子技术,选择适宜的引物及模板DNA浓度对扩增出清晰、稳定的条带很重要,优化后的10μL InDel-PCR反应体系及扩增程序,成功筛选出14条多态性较高的InDel引物,为后续的色素辣椒分子标记研究提供了可靠技术依据.