文献类型： 中文期刊

作者： 张慧 ¹ ; 何小兵 ¹ ; 房永祥 ¹ ; 谭金龙 ¹ ; 余翰维 ¹ ; 高真贞 ¹ ; 景伟 ¹ ; 苏洋 ¹ ; 陈国华 ¹ ; 景志忠 ¹ ;

作者机构： 1.中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室

关键词： 牛结节性皮肤病病毒;ORF141基因;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 1072-1078

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得牛结节性皮肤病病毒（lumpy skin diseasevirus,LSDV）ORF141蛋白及其多克隆抗体，本研究参照Gen Bank收录的LSDV ORF141基因序列，利用Snap Gene软件设计引物，以LSDV基因组为模板，利用PCR扩增ORF141基因，构建原核表达重组质粒p ET-30a(+)-ORF141，转化至Rosseta大肠杆菌表达细胞中，用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，然后利用SDS-PAGE和Western-blot对目标蛋白进行鉴定，用该蛋白免疫新西兰大白兔，利用免疫荧光试验确定多克隆抗体的特性。结果表明，本研究成功构建了p ET-30a(+)-ORF141原核表达载体，在1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导表达目的蛋白，大小约25 ku，主要以包涵体的形式存在；制备的抗LSDV ORF141多克隆抗体的效价可达1∶409 600，免疫荧光试验表明其能够识别LSDV病毒中ORF141编码的天然蛋白，这为后续明确LSDV ORF141基因编码蛋白的生物学功能研究奠定了基础。