文献类型： 中文期刊

作者： 白宇彤 ¹ ; 黄志成 ¹ ; 李章程 ² ; 陈胜利 ² ; 兰仕梅 ² ; 李延召 ² ; 刘爽 ² ; 郝华芳 ² ; 储岳峰 ² ; 刘冠慧 ¹ ;

作者机构： 1.河北工程大学生命科学与食品工程学院

2.中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室

关键词： 牛支原体;原核表达;多克隆抗体;免疫原性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 1538-1544

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究牛支原体MBOVPG45＿0212蛋白的免疫学功能，以牛支原体基因组DNA为模板，PCR扩增MBOVPG45＿0212基因并测序分析；经基因密码子优化后构建重组质粒pET-30a-0212，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达，用Ni-NTA纯化目的蛋白，Western-blot验证纯化的重组蛋白与牛支原体不同血清的反应情况；将纯化蛋白免疫小鼠后制备多克隆抗体，Western-blot测定多克隆抗体是否识别牛支原体天然蛋白。PCR结果显示，MBOVPG45＿0212基因全长约1 014 bp;pET-30a-0212重组质粒在大肠杆菌中于16℃经0.02 mmol/L IPTG诱导12 h能成功表达大小约43 ku的目的蛋白；纯化蛋白与牛支原体感染血清、免疫血清均能产生特异性反应，免疫小鼠血清效价达到1∶51 200以上，显示重组MBOVPG45＿0212蛋白具有良好的免疫原性和反应活性。获得纯化重组MBOVPG45＿0212蛋白，并制备其高效价的多克隆抗体，为其后续生物学功能研究奠定了基础。