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分子对接、CRISPR/Cas9技术筛选并验证DNA ligase Ⅳ抑制剂

文献类型： 中文期刊

作者： 肖红卫 1 ;

作者机构： 1.动物胚胎工程与分子育种湖北重点实验室/湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： DNA连接酶Ⅳ;抑制剂;荧火虫荧光素酶报告载体;CRISPR/Cas9;小分子化合物

期刊名称： 湖北农业科学

ISSN： 0439-8114

年卷期： 2021 年 023 期

页码： 177-180

收录情况： 北大核心

摘要： 为了筛选靶向DNA连接酶Ⅳ的抑制剂以实现更有效的基因定点插入,采用分子对接技术筛选出与前期研究中靶向DNA连接酶Ⅳ的抑制剂SCR7作用类似的小分子化合物。筛选到与化合物库一致的nocodazole、Fisetin和Methylene blue 3个小分子化合物,通过用MSTN基因T11位点序列截断的Firefly Luciferase荧光素酶报告载体结合CRISPR/Cas9-gRNA-T11载体共转细胞,并结合不同的小分子化合物处理。结果表明,没有用小分子化合物处理时,萤火虫荧光素酶被截断的位置发生NHEJ修复,不能得到大量有活性的萤火虫荧光素酶;经过小分子化合物处理,抑制了细胞内的NHEJ,提高了HDR效率,能得到大量有活性的萤火虫荧光素酶。使用nocodazole、Methylene blue和Fisetin处理后的萤火虫荧光素酶检测结果 65 256.3、53 713和77 058.3分别是SCR7处理后的萤火虫荧光素酶检测结果 41 905.3的1.6、1.3和1.8倍,是没有SCR7处理后的萤火虫荧光素酶检测结果 10 120的6.4、5.3和7.6倍。证明所用的筛选策略正确,所筛选出的小分子化合物是具有DNA ligase Ⅳ抑制活性的抑制剂,为后续研究奠定了基础。

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[1]小分子化合物靶向DNA连接酶Ⅳ提高CRISPR/Cas9基因编辑效率的研究进展. 肖红卫,毕延震. 2020

[2]基因编辑技术及其在畜牧业中的应用研究进展. 李莉,毕延震,华再东,任红艳,肖红卫,刘西梅,郑新民. 2016

[3]一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略. 陈建武,任红艳,华文君,刘西梅,綦世金,周黎,欧阳艳,毕延震,杨烨. 2017

[4]CRISPR/Cas基因编辑技术及其在真菌中的应用. 殷朝敏,范秀芝,史徳芳,高虹. 2017

[5]用Cre/LoxP和CRISPR基因工程技术构建猪肌肉生长抑制素双等位基因敲除细胞系. 綦世金,毕延震,刘西梅,华文君,郑新民. 2017

[6]CRISPR/Cas9技术制备猪肌肉生长抑制素基因敲除细胞. 华文君,毕延震,刘西梅,张立苹,肖红卫,郑新民,华再东,任红艳. 2015

[7]非人灵长类动物基因编辑技术的应用及挑战. 毕延震,肖红卫,张立苹,任红艳,华再东,华文君,王正,牛敏杰,林郑云,任习东,孙理华,郑新民. 2018

[8]CRISPR/Cas9基因编辑技术介导SST基因敲除细胞的制备. 王紫君,任红艳,肖红卫,华再东,毕延震. 2020

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